大肠杆菌是导致仔猪肠道功能紊乱及腹泻的重要致病菌,其中ETEC K88是比较常见的致病菌之一,给养猪生产带来重大损失。因此,为了揭示ETEC K88影响仔猪肠上皮细胞免疫功能的具体作用机制,喆图小编有必要给大家分享一下ETEC K88攻毒(或不攻毒)的IPEC-J2细胞转录组学的变化。

       ETEC K88血清型为O149:K91:K88ac。试验共分为2个处理组(对照组、K88组),每个处理组3个重复。将肠上皮细胞IPEC-J2接种于Transwell 6孔板上室,加入DMEM/F12*培养基,待细胞分化后(约为1.3×10~6个/孔),用ETEC K88攻毒处理细胞(K88:细胞=50:1),于37℃、5%气套式二氧化碳培养箱中培养3 h。

       对差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)的GO(gene ontology)分析显示,共553个DEGs注释到21个GO条目,这些条目主要参与细胞过程、生物过程、代谢调节、信号调节、发育过程及免疫过程等。

       气套式二氧化碳培养箱培养结束后,PBS清洗细胞2遍后收集细胞。采用RNA-Seq技术研究2组细胞的转录组,并对差异表达基因进行统计分析。结果显示:与对照组相比,ETEC K88攻毒后,得到差异表达基因共126个,其中上调基因为80个,下调基因为46个。

       通过对差异表达基因的Pathway分析表明,差异表达的基因显著富集于22个代谢通路。表明ETEC K88攻毒后显著影响了IPEC-J2细胞的Toll-like受体信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、NF-κB信号通路、T细胞信号通路、MAPK信号通路以及趋化因子等信号通路。

       这些差异表达的基因大多富集于免疫反应及炎症反应的相关通路中,表明差异表达基因在细胞中发挥了类似的功能。综上,ETEC K88攻毒后,细胞发生相应的免疫反应及炎症反应,这可能是ETECK88导致仔猪腹泻的重要原因之一。

       以上就是本篇的全部内容了，如需了解更多技术知识，欢迎联系上海喆图科学仪器有限公司。